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技術(shù)文章

恒遠干貨|對ELISA實驗結(jié)果中顯色淡靈敏度偏低問題分析

點擊次數(shù)：14395   發(fā)布時間：2022/4/24 16:59:12

 當(dāng)完成所有實驗步驟進行底物TMB溶液顯色，發(fā)現(xiàn)酶標板中孔的顯色比較淺，只有微弱的信號呈現(xiàn)，下面恒遠生物來跟大家分析一下可能的原因及解決方法：
1、可能原因：試劑盒未充分平衡
解決方法：試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。
 
2、可能原因：樣品不適合做ELISA檢測
解決方法：樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測或者需要優(yōu)化檢測的條件（例如稀釋液的成分）
 
3、可能原因：酶標板在貯存或洗后拍干時過分干燥
解決方法：防止板過于干燥。
 
4、可能原因：包被抗體遭到破壞
解決方法：操作溫和，移液槍不能碰到孔底。
 
5、可能原因：樣本和抗體孵育條件不合適
解決方法：按照說明書條件，建議孵育過程中全程振蕩孵育。
 
6、可能原因：洗滌浸泡時間過長
解決方法：按照說明書操作，勿人為增加浸泡時間。
 
7、可能原因：偶聯(lián)HRP試劑污染
解決方法：棄去試劑，重新配置。
 
8、可能原因：錯誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑
解決方法：棄去試劑，重新配置。
 
9、可能原因：TMB底物孵育時間過短，因非人為因素影響，需要優(yōu)化孵育時間
解決方法：確定合適的孵育時間：人為判定-濃度S1出現(xiàn)深藍色，S4-5有淡藍色�；驒C器判定620 nm波長下測定OD值達到0.6-0.65。
 
10、可能原因：樣本濃度過高或存在基質(zhì)效應(yīng)
解決方法：建議做不同稀釋倍數(shù)，確認樣本稀釋倍數(shù)。
 
11、可能原因：酶標儀濾光片設(shè)置有問題或者波長選擇不對
解決方法：確認儀器設(shè)置及選擇正確的波長檢測。
 
12、可能原因：酶標板不適合做ELISA
解決方法：不能使用細胞培養(yǎng)板，建議使用ELISA用高吸附力板子
 
總結(jié)為避免顯色淡靈敏度低，需注意以下幾點：
1、 常規(guī)ELISA試劑盒平衡至30min；
2、 檢測抗體、偶聯(lián)HRP請按說明書稀釋比；
3、 樣本、抗體孵育條件（溫度、轉(zhuǎn)速），請根據(jù)說明書；
4、 控制TMB底物顯色時間。
 
由于篇幅有限，詳情請“恒遠生物”微信公眾號或聯(lián)系我司業(yè)務(wù)員了解哦！

原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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