聯(lián)系我們/CONTACT US

聯(lián)系人：錢經理

電話：13636351217

手機：13636351217，13636351073

地址：上海市松江臨港科技城漢橋文化科技園B座

郵編：201615

傳真：021-64881400

郵箱：2881726255@qq.com

阿儀網商鋪：http://www.app17.com/c60514/

手機網站：m.shhyswkj.com

產品分類/PRODUCT CLASS

澳洲血清

胎牛血清

美國進口血清

ELISA試劑盒

ABCAM抗體

Spectrum試劑

進口標準品

Amresco試劑

其它方法測試盒

免疫化學品

金標試劑盒

食品檢測試劑盒

代理品牌

技術文章

上海恒遠為您分享：細胞的凍存與復蘇

點擊次數：14693 發(fā)布時間：2021/2/26 9:06:49

適度地保存定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。天的技術文章中就為大家講解下細胞的凍存與復蘇操作方法！

操作步驟

（）細胞凍存

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；

2. 取對數生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中；

3. 離心1000rpm，5min；

4. 去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節(jié)凍存液中細胞的終密度為5×106/ml～1×107/ml；

5. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；

6. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；

7. 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。

（二）細胞復蘇

1.將冷凍管從液氮中取出，迅速投入37℃水浴融化，細胞融化后要盡快(約1min)移出37℃水浴。37℃水浴時間延長會提高細胞死亡率，復蘇過程中般細胞死亡率在20%～25%之間。

2.迅速用酒精棉球擦拭冷凍管外部殺菌消毒，然后放置在冰浴上。

3.小心開啟瓶蓋，把細胞轉入含有4mL培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，然后把培養(yǎng)瓶移至培養(yǎng)箱，26℃～28℃培養(yǎng)1h，讓細胞貼壁。

4.細胞貼壁后，小心移棄培養(yǎng)基，主要是去掉DMSO(懸浮生長細胞要通過離心沉淀除去DMSO)、死細胞及其碎片，加5mL新鮮培養(yǎng)基，26℃～28℃培養(yǎng)。

5.細胞培養(yǎng)24h后，更換新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)直到形成單層，便可以傳代。

6.詳細記錄復蘇細胞的名稱、數量、復蘇時間、存放部位等。

注意事項

1．從增殖期到形成致密的單層細胞以的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存，但好為對數生長期細胞。在凍存天好換次培養(yǎng)液；

2．將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷；

3．凍存和復蘇好用新配制的培養(yǎng)液。

原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術發(fā)展有限公司

人妻夜夜爽天天爽一区,久久精品国产亚洲不AV麻豆,激情综合色综合久久综合,男人五月天天堂在线

主營產品：