人體內(nèi)的細(xì)胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性的，有些死亡則是病理性的，有關(guān)細(xì)胞死亡過(guò)程的研究，已成為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)，身為一位科研工作者，對(duì)細(xì)胞凋亡的幾種檢測(cè)方法都應(yīng)該有所了解！

    一、形態(tài)學(xué)觀察方法

    1.HE染色、光鏡觀察：凋亡細(xì)胞呈圓形，胞核深染，胞質(zhì)濃縮，染色質(zhì)成團(tuán)塊狀，細(xì)胞表面有“出芽”現(xiàn)象。

    2.丫啶橙（AO）染色，熒光顯微鏡觀察：醫(yī)學(xué)教/育網(wǎng)搜集整理活細(xì)胞核呈黃綠色熒光，胞質(zhì)呈紅色熒光。凋亡細(xì)胞核染色質(zhì)呈黃綠色濃聚在核膜內(nèi)側(cè)，可見(jiàn)細(xì)胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。

    3.臺(tái)盼藍(lán)染色：如果細(xì)胞膜不完整、破裂，臺(tái)盼藍(lán)染料進(jìn)入細(xì)胞，細(xì)胞變藍(lán)，即為壞死。如果細(xì)胞膜完整，細(xì)胞不為臺(tái)盼藍(lán)染色，則為正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞。此方法對(duì)反映細(xì)胞膜的完整性，區(qū)別壞死細(xì)胞有一定的幫助。

    4.透射電鏡觀察：可見(jiàn)凋亡細(xì)胞表面微絨毛消失，核染色質(zhì)固縮、邊集，常呈新月形，核膜皺褶，胞質(zhì)緊實(shí)，細(xì)胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小體和凋亡小體被臨近巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象。

    二、DNA凝膠電泳

    1.檢測(cè)原理

    細(xì)胞發(fā)生凋亡或壞死，其細(xì)胞DNA均發(fā)生斷裂，細(xì)胞內(nèi)小分子量DNA的片斷增加，高分子DNA減少，胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)DNA的片斷。但凋亡細(xì)胞DNA斷裂點(diǎn)均有規(guī)律的發(fā)生在核小體之間，出現(xiàn)180－200bpDNA的片斷，而壞死細(xì)胞的DNA斷裂點(diǎn)為無(wú)特征的雜亂片斷，利用此特征可以確定群體細(xì)胞的死亡，并可與壞死細(xì)胞區(qū)別。

    2.結(jié)果判斷

    正�；罴�(xì)胞DNA 電泳出現(xiàn)階梯狀（LADDER）條帶；壞死細(xì)胞DNA電泳類(lèi)似血抹片時(shí)的連續(xù)性條帶。

    三、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）核小體測(cè)定

    凋亡細(xì)胞的DNA斷裂使細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)核小體。核小體由組蛋白及其伴隨的DNA的片斷組成，可由ELISA法檢測(cè)。

    1.檢測(cè)步驟

    1.1.將凋亡細(xì)胞裂解后高速離心，其上清液中含有核小體；

    1.2.在微定量板上吸附組蛋白體；

    1.3.加上清夜使抗組蛋白抗體與核小體上的組蛋白結(jié)合；

    1.4.加辣過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗DNA抗體使之與核小體上的DNA結(jié)合；

    1.5.加酶的底物，測(cè)光吸收制。

    2、用途

    該法敏感性高，可檢測(cè)5*100/ml凋亡細(xì)胞。可用于人、大鼠、小鼠的凋亡檢測(cè)。該法不需要特殊儀器，適合基層工作，但是不能測(cè)定凋亡細(xì)胞發(fā)生的絕多對(duì)量。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司