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酶聯(lián)免疫檢測試劑盒測試原理

點擊次數(shù)：15233   發(fā)布時間：2019/10/25 8:44:15

 　　酶聯(lián)免疫檢測試劑盒測試原理
 
　　酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的基本原理有三條：
 
　�。�1）抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學活性；
 
　�。�2）抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學和酶學活性；
 
　　（3）酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結(jié)果。
 
　　由于酶聯(lián)免疫檢測試劑盒一方面是建立在抗原與抗體免疫學反應(yīng)的基礎(chǔ)上，因而，具有特異性。而另一方面又由于酶標記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結(jié)合物，它可以催化底物分子發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生放大作用，正因為此種放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，酶聯(lián)免疫檢測試劑盒是一種既敏感又特異的方法。
 
　　以人白介素6(IL-6)為例，說明ELISA實驗檢測原理。本實驗采用雙抗體夾心ELISA法。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（ELISA）。預(yù)先包被的抗體為抗人白介素6(IL-6)單克隆抗體。檢測相抗體為多克隆抗體，經(jīng)生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。

原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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