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悄悄把培育細胞遺傳學(xué)的檢測技能告訴你哦

點擊次數(shù)：14764   發(fā)布時間：2019/6/27 9:31:20

細胞培育是體外研討細胞生物學(xué)性狀、遺傳學(xué)及分子生物學(xué)特性zui直接有效的手法。培育細胞遺傳學(xué)的主要檢測技能，包含性染色體的檢測、染色體閃現(xiàn)、染色體顯帶及染色體基因定位等。對培育細胞的分子生物學(xué)檢測主要包含細胞DNA檢測、RNA檢測及蛋白質(zhì)的檢測，而相關(guān)的生物學(xué)檢測主要包含細胞酶學(xué)檢測及細胞凋亡的檢測。

組織培育細胞是研討細胞遺傳zui便利、zui有效的辦法和對象；也是揭示培育細胞性狀的重要方面。人二倍體細胞具有46條染色體數(shù)就是用細胞培育法所確認出來的。當(dāng)前已發(fā)展出染色體分帶、姊妹染色單體分解染色、染色體原位雜交等多種技能。近年染色體熒光基因標記法又取得迅速發(fā)展，使基因作為實體得以在染色體上閃現(xiàn)，從而填補了染色體和分子遺傳學(xué)之間的空白。染色體的研討已成為組織培育技能中重要組成部分。

一、性染色體檢測

(一)原理

在間期細胞核中，女人x染色質(zhì)和男性Y染色質(zhì)均可用特殊染色法閃現(xiàn)出來。女人的兩個x染色體中的一個，在間期時的染色質(zhì)呈異固縮(heteropycnosis)，呈深染的小體稱Barr氏體(圖9—1)。Barr氏體坐落問期細胞核內(nèi)面，呈三角形或半月形小體，易為碳酸復(fù)葒等染料著色。正常女人Barr氏體陽性，男性為陰性。男性Y染色質(zhì)坐落間期細胞核近中心部，易為鹽酸阿的平著色，熒光顯微鏡下調(diào)查發(fā)較強熒光，呈點狀小體，發(fā)光部分系Y姿色體異固縮的長臂。初代培育細胞和二倍體細胞株均可調(diào)查到性染色質(zhì)，傳代細胞系表現(xiàn)不規(guī)律。

(二)辦法

1.碳酸復(fù)紅(basic fuchsin)閃現(xiàn)x染色質(zhì)法

(1)資料：蓋玻片培育的細胞。

(2)染色液

儲存液：稱堿性復(fù)紅3g，溶于1OOml 70％乙醇中，可長時間保存。

(3)染色過程

1)細胞：蓋玻片培育細胞用37℃的BSS漂洗后，立即投入染色液內(nèi)染色5～lOmin(亦可先固定再染色)；如用涂片標本則應(yīng)待涂片干后，迅速投入96％酒精固定10～15min后再染色。

2)分解：用96％酒精分解lmin，分解時要不斷搖擺，把片子上多余的染料漂洗掉。

3)脫水：通過純酒精lmin。

4)封片：二甲苯透明2~3min，樹膠封固。

(4)成果：細胞質(zhì)不著色，細胞核染成紫紅色；陽性Barr氏體附于細胞核膜內(nèi)面呈三角或半月形小體。


2．熒光染色顯不Y染色質(zhì)法


(1)資料：蓋玻片培育的細胞。

(2)染色液

(3)染色過程：Y染色質(zhì)閃現(xiàn)染色與染色體熒光顯帶法相同。

上海恒遠悄悄把培育細胞遺傳學(xué)的檢測技能告訴你哦。

原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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