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周三教你一招,制備抗體全過(guò)程分析

點(diǎn)擊次數(shù):14972   發(fā)布時(shí)間:2018/8/15 11:55:19

    一周又快完了,我司血清、abcam抗體的銷售趨勢(shì)上升明顯,今天周三,如需訂購(gòu)產(chǎn)品,請(qǐng)?jiān)诒竟揪W(wǎng)站或展臺(tái)中留言,今天上海恒遠(yuǎn)教你一招,制備抗體全過(guò)程分析。
·免疫動(dòng)物
免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的 過(guò)程。一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠,按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射?乖ㄟ^(guò)血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官,刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞。
   
·細(xì)胞融合
采用二氧化碳?xì)怏w處死小鼠,無(wú)菌操作取出脾臟,在平皿內(nèi)擠壓研磨,制備脾細(xì)胞懸液。將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合,形成雜交瘤細(xì)胞。
    
·選擇性培養(yǎng)
選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞,一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中,未融合的骨髓瘤細(xì)胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA而死亡。未融合的淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,但其本身不能在體外長(zhǎng)期存活也逐漸死亡。只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,并具有骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖的特性,因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。
         
·雜交瘤陽(yáng)性克隆的篩選與克隆化
在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的雜交瘤細(xì)胞,只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性單克隆抗體的細(xì)胞,因此,必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的免疫學(xué)方法,篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞,并進(jìn)行克隆擴(kuò)增。經(jīng)過(guò)全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識(shí)別抗原的表位及其分子量后,及時(shí)進(jìn)行凍存。
   
·單克隆抗體的大量制備
1.體內(nèi)誘生法:取Balb/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進(jìn)行預(yù)處理。1-2周后,腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖,并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周,可見(jiàn)小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可獲得大量單克隆抗體。
2.體外培養(yǎng)法:將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)程中,雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體,收集培養(yǎng)上清液,離心去除細(xì)胞及其碎片,即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限。各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn),大大提高了抗體的生產(chǎn)量。

    上海恒遠(yuǎn)代理abcam抗體,除了在此方面有專業(yè)的代理及分析研發(fā)外,還包括elisa試劑盒、標(biāo)準(zhǔn)品、血清、培養(yǎng)基、生物試劑等用于實(shí)驗(yàn)室科研使用的試劑,正品代理,而且質(zhì)量有所保障。

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原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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