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技術(shù)文章

恒遠(yuǎn)科研小組發(fā)現(xiàn)可以通過這幾種方法評估培養(yǎng)基性能

點(diǎn)擊次數(shù)：15058   發(fā)布時(shí)間：2018/5/9 10:29:01

    根據(jù)用途、成分、狀態(tài)、用途等不同方面，培養(yǎng)基的分類也是不同的。而不同類型培養(yǎng)基，其用途及優(yōu)缺點(diǎn)有有所不同。據(jù)上海恒遠(yuǎn)恒遠(yuǎn)科研小組了解，原來可以通過這幾種方法評估培養(yǎng)基性能……

一、理化指標(biāo)
理化指標(biāo)包括培養(yǎng)基的色澤，培養(yǎng)基的水分含量，培養(yǎng)基的澄清度，培養(yǎng)基的PH,固體培養(yǎng)基的凝膠程度。通常由生產(chǎn)廠商通過對原材料、生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)過程進(jìn)行質(zhì)控，使用者通常用感官檢查或pH測定進(jìn)行確認(rèn)。

二、微生物學(xué)指標(biāo)
培養(yǎng)基對目標(biāo)菌的促生長能力(生長率)，培養(yǎng)基對非目標(biāo)菌的抑制能力(選擇性)，培養(yǎng)基的指示能力(生化特性)。
微生物學(xué)評估方法-使用一套合適的質(zhì)控菌株進(jìn)行測試
1.定量法—培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家或?qū)ε囵B(yǎng)基質(zhì)量有特殊要求的實(shí)驗(yàn)室對培養(yǎng)基質(zhì)控；
2.半定量法—實(shí)驗(yàn)室對培養(yǎng)基的質(zhì)控；
3.定性法—實(shí)驗(yàn)室對培養(yǎng)基的質(zhì)控。

三、固體培養(yǎng)基的生長率測試-定量法
選擇合適稀釋度的質(zhì)控菌懸液(目標(biāo)菌)0.1mL，均勻涂布接種于待測平板和參比平板。每一稀釋度接種兩個(gè)平板。并按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的培養(yǎng)條件培養(yǎng)平板。
計(jì)算生長率PR：
PR=NS/N0
PR：生長率。
NS：待測培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)。
N0：參比培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù)(該菌落總數(shù)應(yīng)≥100CFU)。
  
四、質(zhì)控菌株的要求
1.具典型反應(yīng)特性的生長良好的陽性菌株；
2.弱陽性菌株(對培養(yǎng)基中選擇劑等試劑敏感性強(qiáng)的菌株)；
3.不具有該特性的陰性菌株；
4.部分或完全受抑制的菌株。
五、固體培養(yǎng)基的生長率測試半定量法
將質(zhì)控菌株接種到非選擇性肉湯培養(yǎng)過夜。
用1ul接種環(huán)按圖劃線接種：
計(jì)算生長指數(shù)G：
每條有比較稠密菌落生長的劃線則G為1，每個(gè)培養(yǎng)皿上G為16。
如果僅一半的線有菌落生長，則G為0.5。
如果劃線上沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半，則G為0。
記錄每個(gè)平板的得分總和便得到G。
六、固體培養(yǎng)基的生長率測試-定性法
將質(zhì)控菌株接種到非選擇性肉湯培養(yǎng)過夜。
用1ul接種環(huán)取測試菌培養(yǎng)物在測試培養(yǎng)基表面劃平行直線(細(xì)菌)，或用接種針直接挑取斜面培養(yǎng)物點(diǎn)種接種(霉菌)。并按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的培養(yǎng)條件培養(yǎng)平板。
培養(yǎng)后按以下方法對培養(yǎng)基計(jì)分：
0 表示無生長；
1 表示微弱生長；
2 表示生長良好。

七、固體培養(yǎng)基生長率評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)
非選擇性固體培養(yǎng)基和固體計(jì)數(shù)培養(yǎng)基PR值應(yīng)不小于0.7；G值應(yīng)大于6。
選擇性固體培養(yǎng)基PR值一般應(yīng)不小于0.5，應(yīng)為0.1 。
選擇性計(jì)數(shù)固體培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長率一般不小于0.7 。
定性法目標(biāo)菌得分應(yīng)為2。
固體培養(yǎng)基選擇性測試-半定量法
將質(zhì)控菌株接種到非選擇性肉湯培養(yǎng)過夜。
用1μl接種環(huán)取選擇性測試工作菌懸液1環(huán)，在待測培養(yǎng)基表面劃六條平行直線，同時(shí)接種兩個(gè)平板，劃線時(shí)可在培養(yǎng)基下面放一個(gè)模板圖，按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的培養(yǎng)條件培養(yǎng)平板。

八、固體培養(yǎng)基選擇性測試-半定量法
計(jì)算G：
每條有比較稠密菌落生長的劃線則G為1，每個(gè)培養(yǎng)皿上*多為6分。
如果僅一半的線有菌落生長，則G為0.5。
如果劃線上沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半，則G為0。
評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：
G應(yīng)小于6。
九、固體培養(yǎng)基生化特性測試-定性法
分別觀察質(zhì)控菌株(包括目標(biāo)菌和非目標(biāo)菌)在培養(yǎng)基上形態(tài)、顏色及生化特征。
評價(jià)培養(yǎng)基的指示系統(tǒng)是否正常。
液體培養(yǎng)基測試-半定量法
混合菌接種：在待測液體培養(yǎng)基中接種10~100CFU目標(biāo)菌，同時(shí)接種1000~5000CFU非目標(biāo)菌，按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定條件培養(yǎng)。
非目標(biāo)菌接種：在待測液體培養(yǎng)基中分別接種上述非目標(biāo)菌，按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定條件培養(yǎng)。
用10μL接種環(huán)取1環(huán)混合菌接種培養(yǎng)物，劃線接種于特定的選擇性平板上，按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定條件培養(yǎng)。
吸取非目標(biāo)菌接種培養(yǎng)物10μL，以涂布法或傾注法接種于非選擇性平板上(如TSA)，按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定條件培養(yǎng)。
十、評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)
1.目標(biāo)菌在選擇性平板上的菌落應(yīng)>10CFU，則生長率良好。
2.非目標(biāo)菌在非選擇性平板上菌落數(shù)應(yīng)<100CFU，則表示待測培養(yǎng)基選擇性良好。

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