眾所周知，ELISA 是蛋白定量檢測的金標(biāo)準(zhǔn)。但是樣本的采集、處理及保存方法對 ELISA 實驗的成功有至關(guān)重要的作用。所以為了您ELISA 實驗準(zhǔn)確、順利的進(jìn)行，現(xiàn)利用我們公司在 ELISA 實驗中積累的精益技術(shù)和豐富經(jīng)驗，將在 ELISA 實驗中遇到的常見樣本采集、處理、保存方法予以歸納、匯總，為您實驗的成功打好基礎(chǔ)。另外，針對不同的檢測試劑盒或許有不同的樣本處理方法，請參照您所購買試劑盒中的處理方法。特殊樣本的具體采集處理保存方法請參考我們上海恒遠(yuǎn)生物上的文章或相關(guān)參考文獻(xiàn)。

常見樣本采集方法：
血清：全血在室溫自然凝固30分鐘后，1000g離心30分鐘，小心收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
血漿：根據(jù)試劑盒要求選擇合適的抗凝劑，與全血混合 20 分鐘后，1000g離心30分鐘，小心收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：將細(xì)胞培養(yǎng)液300 g離心10分鐘去除沉淀物，，仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
所有標(biāo)本收集完成后，應(yīng)及時分裝放在-20℃或-70℃條件下保存，避免反復(fù)凍融。如果在24 小時內(nèi)檢測，樣本可以存放在 2-8℃。在分析前，冷凍樣本應(yīng)該緩慢的恢復(fù)至室溫，輕柔地混勻。

注意事項：
（1）要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性，因此，在以 HRP 為標(biāo)記酶的 ELISA 測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的 HRP 底物反應(yīng)顯色。
（2）樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染。一則細(xì)菌所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶會對用相應(yīng)酶標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
（3）血清樣本如果是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存，應(yīng)在-70℃以下凍存。
（4）冰凍保存的血清樣本須注意避免反復(fù)凍融。樣本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力會對樣本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融樣本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。
（5）樣本保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。

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原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司