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技術(shù)文章

ELISA試劑盒檢測成功的奧秘

點擊次數(shù)：14873   發(fā)布時間：2015/4/22 10:00:59

     想要實驗結(jié)果完美自然少不了elisa試劑盒操作條件，我司業(yè)務(wù)錢經(jīng)理整理了一份關(guān)于ELISA試劑盒操作條件，快來看看吧。
ELISA試劑盒操作步驟
ELISA試劑盒使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。ELISA試劑盒重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。
根據(jù)ELISA試劑盒試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件，可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。  
（一）雙抗體夾心法
（二）雙位點一步法
（三）間接法測抗體
（四）競爭法
（五）捕獲法測IgM抗體
（六）應(yīng)用親和素和生物素
ELISA試劑盒普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗. 在這種方法中, 通常標準配體是固定的, 通過加入溶液相受體或蛋白質(zhì)來使之成鍵. ELISA試劑盒通過加入與受體特異性反應(yīng)的抗體來定量成鍵的受體, 而且*初抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測量. 第二種抗體能識別抗體的末端, 在其末端的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發(fā)生反應(yīng), 從而使溶液顯色.

原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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